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甲酸乙酯用作硝酸纖維素、乙酸纖維素等的溶劑，以及食品、香煙、谷類、干燥果品等的殺菌劑、殺幼蟲劑和熏蒸劑。甲酸乙酯作為香精可用于調合桃子、香蕉、蘋果、杏、菠蘿、漿果等香氣，亦可作為黃油、白蘭地酒、甜酒、威士忌酒等的香料。甲酸乙酯也是有機合成的中間體。例如在制藥工業，用于抗腫瘤藥物富雪定、維生素B1的生產；甲酸乙酯與丙酮在甲醇鈉-二甲苯溶液中縮合可得乙酰基乙烯醇鈉，與乙酰甘氨酸酯縮合再與硫氰化鉀環合可得2-巰基咪唑-4-羧酸乙酯。
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